土壤中性木聚糖酶（Soil Neutral Xylanase，S-NEX）测定试剂盒说明书

更新时间：2025-01-13

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土壤中性木聚糖酶（Soil Neutral Xylanase，S-NEX）测定

试剂盒说明书

微量法 100T/48S

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，NEX 一般分离自最适生长pH 为 6-8 的微生物。

测定原理：

NEX 在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，可计算NEX 活力。

组成：

产品名称	BO6091-100T/48S	Storage
缓冲液：液体	10ml	4℃
试剂一：液体	3ml	4℃避光
试剂二：液体	10ml	4℃避光
说明书	一份

自备仪器和用品：

天平、常温离心机、震荡仪、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。

样品处理：

新鲜土样风干，过 30-50 目筛。

测定操作表：

1、分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 540nm。

2、操作表

	对照管	测定管
土样（g）	0.02	0.02
缓冲液（μl）	150	100
试剂一（μl）		50
混匀，50℃震荡反应 30min，立即 90℃水浴 10min，8000g，25℃离心 10min，取上清 100μl
试剂二（μl）	100	100
混匀，90℃水浴中显色 5min，取 180μl 于微量石英比色皿/96 孔板测定 540nm 处吸光值 A，分别记为A 对照管、A 测定管，△A=A 测定管-A 对照管。

S-NEX 计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y = 1.6904x + 0.0058，R² = 0.9989

酶活定义：50℃，pH6.0 条件下，每克土壤每天分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量为一个酶活单位。

S-NEX 活力（μmol/d/g 土样）=（△A-0.0058）÷ 1.6904×V 反总×10³÷ W÷T÷ 150

= 28.4×（△A -0.0058）÷ W

V 反总：反应总体积，0.15ml；T：反应时间，1/48d；1000：1mmol/L =10³μmol/L；150：木糖分子量。 b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.8452x + 0.0058，R² = 0.9989

酶活定义：50℃，pH6.0 条件下，每克土壤每天分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量为一个酶活单位。

S-NEX 活力（μmol/d/g 土样）=（△A-0.0058）÷ 0.8452×V 反总×10³÷ W÷T÷ 150

= 56.8×（A540-0.0058）÷ W

V 反总：反应总体积，0.15ml；T：反应时间，1/48d；1000：1mmol/L =10³μmol/L；150：木糖分子量。

注意事项：

1. 保证震荡反应 30min，使酶与底物充分接触。

2. 注意 90℃水浴防止爆开，以免改变反应体系。

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