土壤植酸酶（phytase）试剂盒说明书

更新时间：2025-01-13

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土壤植酸酶（phytase）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。

植酸酶在一定温度和pH 值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在 700nm 处有特征吸收峰，根据 700nm 处吸光值变化可计算得植酸酶活性。

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃避光保存，临用前加缓冲液 30ml 配制，现用现配；用不完的试剂 4℃保存一个月。

显色剂：粉剂×6 瓶，4℃避光保存，临用前根据用量每瓶加 1ml 双蒸水溶解，再加 4ml 试剂二混匀。

天平、低温离心机、可见分光光度计、1ml 玻璃比色皿、恒温水浴锅，甲苯（不允许快递）。

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。

对照管

测定管

样本（g）	0.06	0.06
甲苯	40	40
振荡混匀，室温放置 15min
缓冲液（µl）	1000
试剂一（µl）		1000
混匀，37℃孵育 24h，10000g，4℃离心 5min，取上清
上清	500	500
显色剂（µl）	500	500
混匀，静置 15min，测定 700nm 处吸光值，△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。

酶活性计算公式：

标准曲线：y = 1.759x + 0.0084，R² = 0.9977；x 为标准品浓度（μmol/ml ），y 为吸光值△A。

酶活性定义：在 37℃，pH5.5 的条件下，每克土样每小时从 5mmol/L 的植酸钠溶液中释放出 1μmol 的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性（μmol/h /g 土样）=（△A-0.0084）÷1.759×V 反总÷W÷T

=0.41×（△A-0.0084）

V 反总：反应总体积，1.04ml ；T：反应时间，24h；W：样本质量，0.06g。

1、显色剂需要临用前根据用量配制，每一瓶是 5 个样本的用量，新配制的显色剂若有颜色则已经污染或者试剂过期，应放弃使用。

2、ΔA 线性范围为 0.01-1。