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土壤β-木糖苷酶测定试剂盒说明书

更新时间:2025-01-13      浏览次数:9


土壤β-木糖苷酶(Solid-β- xylosidase, S-β-XYS测定试剂盒说明书

微量法 100T/48S

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶,产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。

测定原理:

S-β-XYS 催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在 405nm 处有特征吸收峰,测定405nm 光吸收增加速率,可计算S-β-XYS 活性。

组成:

 

产品名称

BO6095-100T/48S

Storage

提取液:液体

100ml

4℃

试剂一:液体

1ml

4℃避光

试剂二:液体

10ml

4℃

试剂三:液体

10ml

4℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

粗酶液提取

0.1g 鲜土或风干土样,加入 1ml 提取液进行冰浴匀浆,室温振荡提取 30min,然后 10000g4℃,离心 10min,取上清待测。

测定操作表:

1、分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 405nm

2操作表

 


对照管

测定管

样本μl

40

40



试剂一μl


10


试剂二μl

80

70

混匀,45℃水浴 20min

试剂三μl

80

80

混匀,静置 5min405nm 处测定吸光值A,计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管

设一个对照管。

 

β-木糖苷酶活性计算公式:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y=13.226x+0.0011R2=0.9998x 为标准品浓度(μmol/ml),y 为吸光值ΔA酶活定义:每克土样每天催化产生 1μmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性(μmol/d /g 土样)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷(V ÷V 样总×W)÷T

=16.33×(ΔA-0.0011)÷W

V 样总:加入提取液体积,1ml V 反总:反应总体积,0.12mlV 样:反应中样品体积,0.04ml W样品质量,gT:反应时间,20min=1/72d

b.  96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y=6.613x+0.0011R2=0.9998x 为标准品浓度(μmol/ml),y 为吸光值ΔA酶活定义:每克土样每天催化产生 1μmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性(μmol/d /g 土样)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反总÷(V ÷V 样总×W)÷T

=32.66×(ΔA-0.0011)÷W

V 样总:加入提取液体积,1ml V 反总:反应总体积,0.12mlV 样:反应中样品体积,0.04ml W样品质量,gT:反应时间,20min=1/72d

 

ΔA 控制在 0.01-1 范围内,若ΔA 大于 1,可适当减小样本量。标准曲线线性范围为:0.01μmol/ml-0.5μmol/ml


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