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更新时间：2025-01-11 
浏览次数：21脯氨酸脱氢酶试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
ProDH 是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。脯氨酸是分布*广泛的一种渗透物质，在胁迫
条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯氨酸，降低 ProDH 活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。
利用异硫氰酸甲酯检测 ProDH 催化的脱氢反应，600nm 处吸光值的吸光值的变化反映酶活性的高低。
产品名称 | BH6007-50T/48S | Storage |
提取液：液体 | 60ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 2ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 50ml | 4℃ |
试剂三：粉剂 | 1 瓶 | 4℃ |
试剂四：粉剂 | 1 瓶 | 4℃ |
试剂五：粉剂 | 5 瓶 | 4℃ |
说明书 | 1 份 | |
试剂三临用前加入 8ml 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；试剂四临用前加入 8ml 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆，1500g 4℃离心 15min，取上清液于一支新的 EP 管中，加入一滴试剂一（用 10μl 的枪头加入），涡旋混匀，冰浴放置 30min 后，16000g 4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 600nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1） 混合液的配制：首先将试剂三和试剂四配成溶液（见试剂的组成和配制），临用前根据用量按照试剂二（V）：试剂三（V）：试剂四（V）=7.2（ml）：0.9（ml）：0.9（ml）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少），置于 30℃水浴 5min；
（2） 试剂五的配制：取试剂五一支，临用前加入 1ml 蒸馏水充分溶解待用，现配现用。
（3）1ml 玻璃比色皿中加入 175μl 样本、75μl 试剂五和 750μl 混合液，混匀，立即记录 600nm 处初始吸光值A1 和 10min 后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
（1） 按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每分钟每 mg 组织蛋白在每ml 反应体系中使 600nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
ProDH（U/mg prot）=ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.01÷T =57.14×ΔA÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算：
单位定义：每分钟每 g 组织在每ml 反应体系中使 600nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
ProDH（U/g 鲜重）=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =57.14×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，1ml； V 样：加入样本体积，0.175ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml； T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g。
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